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公司名称:上海继锦化学科技澳洲幸运10开奖结果

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大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)酶联免疫分析试剂盒说明书

发布时间:2013-08-02浏览次数:1083返回列表


本试剂盒仅供研究使用
检测范围:31.2 pg/ml - 2000 pg/ml
低检测限:7.8 pg/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠IGFBP-6,且与其他相关
蛋白无交叉反应。
有效期:6 个月
预期应用:ELISA 法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中
IGFBP-6 含量。
说明
1. 试剂盒保存:未开封的试剂盒应储存于2-8;开封后的酶标板应与干燥
剂一起储存于铝箔袋中置于2-8保存。仅在此出储存条件下,产品在有
效期内可正常使用。
2. 浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3. 中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实
验结果造成任何影响。
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实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗IGFBP-6 抗体的微
孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IGFBP-6 抗体、HRP 标记的亲和
素,经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成
蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的IGFBP-6
呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1。 酶联板(Assay plate ): 一块(96孔)。
2。 标准品(Standard): 2 冻干品。
3. 样品稀释液(Sample Diluent1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent): 1×10ml/瓶。
5。 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent1×10ml/瓶。
6。 生物素标记抗体(Biotin-antibody): 1×120μl/瓶(1100)。
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin): 1×120μl/瓶(1100)。
8. 底物溶液(TMB Substrate): 1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液(Wash Buffer1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。
10. 终止液(Stop Solution): 1×10ml/瓶。
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2。 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof
5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
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标本的采集及保存
1。 血清:全血标本请于室温放置2 小时或4过夜后于1000g离心20 分钟,
取上清即可立即检测;或进行分装,并将标本放于-20-80保存,但
应避免反复冻融。解冻后的样品应再次离心,然后检测。
2。 血浆:可用EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后30 分钟内于2 - 8°C
1000 g离心15 分钟,取上清即可立即检测;或进行分装,并将标本放于
-20-80保存,但应避免反复冻融。解冻后的样品应再次离心,然后
检测。
3。 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20 分钟,取上清即可立即
检测;或进行分装,并将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。
解冻后的样品应再次离心,然后检测。
注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。
只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应
做好详细的记录。后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”
标准品的稀释原则:2 瓶,使用前于6000-10000rpm 离心30 秒。每
瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10 分钟以上,然后反复颠倒
/搓动以助溶解,其浓度为2000 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释2000
pg/ml, 1000 pg/ml, 500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62。5 pg/ml, 31。2
pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15 分钟内配制,用完
丢弃,下次检测使用新鲜配置的标准品。
如配制1000 pg/ml 标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml2000 pg/ml 的上述
标准品加入含0.5ml 样品稀释液的Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以
此类推。
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生物素标记抗体的稀释原则:
打开瓶盖前请离心,收集瓶壁上的溶液。临用前以生物素标记抗体稀释液稀
释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际
配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl 生物素标记抗体加990μl 生物素标记抗体
稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
打开瓶盖前请离心,收集瓶壁上的溶液。临用前以辣根过氧化物酶标记亲和
素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔
100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl 辣根过氧化物酶标记亲和素
990μl 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用
前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀
时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品
稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。加样时,枪头应直接对
准液面,切勿沿孔壁加样。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,
余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于
酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,
37反应120 分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
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2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl
生物素标记抗体加99μl 生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,
在使用前一小时内配制),37,60 分钟。
3. 温育60 分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3 次,每次浸泡1-2 分钟,
200μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液)
100μl3760 分钟。
5. 温育60 分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5 次,每次浸泡1-2 分钟,
200μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl37避光显色(30 分钟内,此时肉眼可见标
准品的前3-4 孔有明显的梯度蓝色,后3-4 孔显色不明显,即可终止)。
7。 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加
入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底
物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm 波长依序测量各孔的光密度(OD 值)。在加终止液
15 分钟以内进行检测。
实验备注
1。 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到
管底。
2。 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是后加底物溶
液及终止液。测量时先用此孔调OD 值至零。
3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上
盖或覆膜。
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4。 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8保存。标准品、生物素标记抗体
工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请
勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物
酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上
铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml
注入孔内,浸泡1-2 分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
请从我们的网站下载专业软件"Curve Exert 1。3",并根据提示制作标准曲线。
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD 值为纵坐标(普通坐标),在半对
数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;
再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方
程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即
为样品的实际浓度。
注意事项
1. 本操作说明适用于48T试剂盒, 48T试剂盒中酶联板、标准品、生物素
标记抗体及辣根过氧化物酶标记亲和素减半。
2. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
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3。 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
4. 一次加样时间控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
5。 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。
6. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释
倍数。
7。 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
8. 底物请避光保存。
9. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

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