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实验时elisa竞争法检测抗-HBe(快速法)

发布时间:2019-12-12浏览次数:3863返回列表

实验原理

用抗-HBe包被固相载体后,同时加被检血清和合适滴度中和试剂HBeAg,若被检血清中含有抗-HBe,则与包被抗-HBe竞争结合HBeAg,被检标本中抗-HBe越多,HBeAg被结合越多,而与包被抗-HBe结合就越少,加底物后显色就越浅;反之越深。

主要试剂与器材

elisa试剂盒:内含已包被抗-HBe板条、HRP-HBe溶液、中和试剂HBeAg溶液、阳性和阴性对照血清,底物溶液(A液、B液)、终止液、洗涤液。

结果分析

P/N0.3为阳性。P/N0。3为阴性。

P/N=待检血清OD/阴性对照OD值。

注意事项

1试剂置2-4℃保存。取用时应先置室温平衡。干包被板条须密封防潮,zui好冻存,取用后余者及时封存。

2恰当选好HBeAg的浓度。

3试剂用前应摇匀。

操作步骤

1、加样:取出干包板条,按编号顺序分别加50μl待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清于相应孔中。设空白对照孔,除此孔外,每孔加HBeAg50μlHRP-HBe50μl,振荡混匀后,置43℃(或37℃)温育1h

2、洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液注满各孔,静置20s,甩干。如此重复洗涤4次,在吸水纸上拍干。

3、显色:每孔加显色剂A、显色剂B50μl,振荡混匀后置37℃避光显色10-15min

4、终止:每孔加终止液50μl,振荡混匀。

5、酶标仪检测:选用450nm波长,用空白孔调零之后测各孔OD值。

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